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1.香蕉视频在线观看网站合成的基本原理?
香蕉视频在线观看网站固相合成法是香蕉视频在线观看网站合成化学的一个重大的突破。它的特点是不必纯化中间产物,合成过程可以连续进行,进而为香蕉视频在线观看网站合成的自动化奠定了基础。目前全自动香蕉视频在线观看网站的合成,基本都是固相合成。其基本过程如下:
基于Fmoc化学合成,先将所要合成的目标香蕉视频在线观看网站的C-端香蕉视频污污的羧基以共价键形式与一个不溶性的高分子树脂相连,然后以这一香蕉视频污污的氨基作为香蕉视频在线观看网站合成的起点,同其它的香蕉视频污污已经活化的羧基作用形成肽键,不断重复这一过程,即可得到香蕉视频在线观看网站。根据香蕉视频在线观看网站的香蕉视频污污组成不同,香蕉视频在线观看网站后处理方式不同,纯化方式也有差异。
2.做免疫用的香蕉视频在线观看网站多长为合适?
答:一般约10-15个香蕉视频污污,当然长一些免疫效果好一些,不过合成费用也会增加。MAP香蕉视频在线观看网站则希望长度在15aa以上,效果较好。另外,10aa以下的香蕉视频在线观看网站免疫效果比较差。
3.免疫用香蕉视频在线观看网站的纯度需要很高吗?
答:一般而言, 免疫用Peptide,70-85%即可。
4.香蕉视频在线观看网站合成的香蕉视频在线观看网站溶解性不好,香蕉视频在线观看网站就有问题对吗?
答:很难准确预测一个香蕉视频在线观看网站的溶解性及合适的溶剂是什么。如果香蕉视频在线观看网站难以溶解就认为香蕉视频在线观看网站合成有问题这个观念并不正确。
5.香蕉视频在线观看网站状态是如何?如何保存储存?
答:香蕉视频在线观看网站提供的香蕉视频在线观看网站是粉末状,一般为灰白色,组成不同,香蕉视频在线观看网站粉末的颜色有差异,香蕉视频在线观看网站一般长期保存需要避光保存,并应保存在-20度,短期可以保存在4度。可以短时间的话是以室温运输。
6.如何溶解香蕉视频在线观看网站?
答:溶解香蕉视频在线观看网站是非常复杂的事情,一般很难一下子确定合适的溶剂。通常是先取一点试验,在没有确定合适的溶剂前千万不要全部溶解。
下列方法有助于您选择合适的溶剂:
(1)判定香蕉视频在线观看网站的电荷特定,设定酸性香蕉视频污污Asp(D),Glu(E)和C端COOH为-1;碱性香蕉视频污污Lys(K),Arg(R),His(H)及N端NH2为+1,其它香蕉视频污污的电荷为0。计算出将电荷数。
(2)如果净电荷数 >0,香蕉视频在线观看网站为碱性,用水溶解:如果不溶解或溶解性不大,加入醋酸(10%以上);如果香蕉视频在线观看网站还不能溶解,加入少量TFA(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(3)如果净电荷数<0,香蕉视频在线观看网站为酸性,用水溶解;如果不溶解或溶解性不大,加入氨水(25ul)溶解,然后加入500ul水稀释。
(4)如果净电荷数=0,香蕉视频在线观看网站为中性,一般需要用有机溶剂如乙腈,甲醇或异丙醇,DMSO等溶解。还有人建议需要尿素来溶解疏水性很大的香蕉视频在线观看网站。
7.非HPLC纯化的香蕉视频在线观看网站中有哪些杂质?
答:粗品和脱盐级别的香蕉视频在线观看网站中香蕉视频在线观看网站和非香蕉视频在线观看网站类杂质:如非全长香蕉视频在线观看网站和香蕉视频在线观看网站后处理的一些原料如DTT、TFA等
8.HPLC纯化的香蕉视频在线观看网站有哪些杂质?
答:经过HPLC纯化的香蕉视频在线观看网站,仍会有一些一些杂质存在,其中的杂质主要是短肽和微量TFA。
9.多长的香蕉视频在线观看网站为合适?
答:香蕉视频在线观看网站合成需要考虑香蕉视频在线观看网站的长度,电荷,亲疏水性等因素。长度越长,合成粗品的纯度和产率都随着降低,纯化的难度和无法合成的几率就会大些。当然香蕉视频在线观看网站功能区的序列是无法改变的,但是为了香蕉视频在线观看网站的顺利合成,有时不得不在功能取的上下游增加一些辅助香蕉视频污污,以改善香蕉视频在线观看网站的溶解性和亲疏水性。如果香蕉视频在线观看网站太短,合成也可能有问题,主要问题是合成的香蕉视频在线观看网站在后处理过程中有一定的难度,5肽以下的香蕉视频在线观看网站,一般要有疏水的香蕉视频污污,否则后处理难度加大。15个香蕉视频污污残基以下的香蕉视频在线观看网站一般都可以得到满意的产率和得率。
10.如何从香蕉视频在线观看网站序列中判定香蕉视频在线观看网站的溶解性?
(1)香蕉视频在线观看网站中如果含有高比例的疏水性很强的香蕉视频污污如和Leu,Val,IIe,Met,Phe和Trp,香蕉视频在线观看网站很难溶解与水性溶液中或根本不可能溶解。这些香蕉视频污污无论是纯化或合成,都有可能有问题。
(2)一般情况下疏水性香蕉视频污污的比例<50%,不能连续5个连续aa为疏水性,带电荷的香蕉视频污污的(正电荷K,R,H,N-terminus,负电荷D,E,C- terminus)的比例达到20%,在香蕉视频在线观看网站的N或C短如果能增加极性香蕉视频污污,也可以改善溶解性。
11.为什么含有Cys,Met,或Trp的香蕉视频在线观看网站难合成?
答:含有Cys, Met,或Trp的香蕉视频在线观看网站难以合成,同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定,易氧化。这些香蕉视频在线观看网站的使用和储存都需要特别注意,避免反复开启盖子。
12.为什么有些香蕉视频在线观看网站的合成产率或纯度会比较低?
答:香蕉视频在线观看网站合成与引子合成有比较大的区别,不能合成的引子很少,但是不能合成的香蕉视频在线观看网站经常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr这些香蕉视频污污比邻或重复时,香蕉视频在线观看网站链在合成过程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。以下几种情形,合成效率和产物的纯度都比较低,如:重复Pro,Ser-Ser,重复Asp,4个连续Gly等.
13.香蕉视频在线观看网站是如何纯化的?
答:香蕉视频在线观看网站纯化一般使用反相柱(如C8,C18等),214nm。缓冲体系通常为含TFA的溶剂,pH 2.0 。Buffer A为含0.1%TFA in ddH2O,Buffer B为1%TFA/ACN/ pH 2.0。纯化前用Buffer A溶解;如果溶解不好,用Buffer B溶解后,然后用Buffer A稀释;对疏水性强的香蕉视频在线观看网站,有时还需要加入少量的Formic Acid或醋酸。HPLC分析香蕉视频在线观看网站粗产物,如果香蕉视频在线观看网站不长(15aa以下),一般会有主峰,主峰通常为全长产物;对于20aa以上的长肽,如果没有主峰,HPLC需搭配Mass来判定分子量,进而确定哪个峰是所要合成的香蕉视频在线观看网站。